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關于UHPLC色譜柱填充和性能的評價指標

發布時間:2017-11-26瀏覽:1015次
UHPLC色譜柱的性能除了與固定相性能有關外,還與填充技術有關。在正常條件下,填料粒度>20µm時,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20µm時,濕法填充較為理想。填充方法一般有4種:①高壓勻漿法,多用于分析柱和小規模制備柱的填充;②徑向加壓法,Waters;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;④干法。柱填充的技術性很強,大多數實驗室使用已填充好的商品柱。
必須指出,液相色譜柱的獲得,裝填技術是重要環節,但根本問題還在于填料本身性能的優劣,以及配套的色譜儀系統的的結構是否合理。
無論是自己裝填的還是購買的色譜柱,使用前都要對其性能進行考察,使用期間或放置一段時間后也要重新檢查。柱性能指標包括在一定實驗條件下(樣品、流動相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復性在±5%或±10%以內。進行柱效比較時,還要注意柱外效應是否有變化。
一份合格的UHPLC色譜柱評價報告應給出柱的基本參數,如柱長、內徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對稱度和柱壓降等。
UHPLC色譜柱的維護:
1、使用保護柱
2、大多數柱的PH穩定范圍是2-7.5,盡可能在此范圍內使用
3、避免流動相組成及極性有劇烈變化
4、流動相使用前必須經脫氣和過濾處理
5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,要在實驗完畢將柱子沖洗干凈
6、壓力升高時更換保護柱
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